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檢測知識
SN/T 0168-2015 進出口食品中菌落總數計數方法 標準內容
日期:2023-01-03 09:56:20作者:百檢網 人氣:0

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1 范圍

本標準規(guī)定了進出口食品中需氧菌及兼性厭氧菌的菌落總數計數方法。

本標準適用于各種進出口食品及其原料,有專門規(guī)定檢驗方法的除外。其他產品可參考使用本標準。

2 術語和定義

下列術語和定義適用于本文件。

菌落總數 aerobic plate counts;APC

食品檢樣經過處理,在一定條件(如合適的培養(yǎng)基、溫度、時間等)下培養(yǎng)后,所得1mL(或1g)檢樣形成菌落的總數。本標準規(guī)定的培養(yǎng)條件下所得的結果,只包括一群在平板計數瓊脂上生長發(fā)育的嗜中溫需氧菌的菌落總數。

注:菌落總數是指產品中所有需氧微生物含量的高低,是衡量產品受污染程度的一項重要指標。

2.2 估計值 estimation of aerobic plate counts;EAPC

平板菌落計數的估計值。

2.3 菌落形成單位 colony-forming units;CFU

個細菌在平板計數瓊脂培養(yǎng)基上生長形成肉眼可見的菌落。

2.4 多不可計 too numerous to count;TNTC

平板上的菌落數太多而無法計數。

2.5 實驗室事故 laboratory accident;LA

實驗過程污染等導致結果無效的情況。

3 環(huán)境、設備和材料

3.1 環(huán)境要求:實驗室環(huán)境要求干浄、光照充足、通風良好,工作臺要平穩(wěn)且臺面面積足夠大。需定期對工作區(qū)域內空氣中的微生物密度進行監(jiān)測,可將傾注有瓊脂的平皿在空氣中暴露15min后放培養(yǎng)箱(36℃±1℃)中進行培養(yǎng),48h后每個平皿上的菌落不能超過15個。

3.2 均質器和均質袋或均質杯。

3.3 天平:感量0.1g。

3.4 剪刀、鑷子、刀子、叉子或大湯勺:各實驗室可根據自己的愛好選擇,方便取樣即可。

3.5 玻璃平皿或塑料平皿:建議使用15mm×90mm的平皿。

3.6 滅菌吸管或移液器:量程分別為1mL、5mL和10mL,刻度為0.1mL。

3.7 帶橡膠塞或塑料螺旋帽的玻璃稀釋瓶:容量200mL。

3.8 恒溫水浴箱:45℃±1℃,用來融化凝固的瓊脂用。

3.9 恒溫培養(yǎng)箱:36℃±1℃。

3.10 冰箱:0℃~5℃。

3.11 冰柜:-20℃~-15℃。

3.12 合適溫度范圍的溫度計(已計量)。

4 培養(yǎng)基、試劑

4.1 平板計數瓊脂(參見附錄A.1)。

4.2 磷酸鹽緩沖稀釋液(參見附錄A.2)。

4.3 無菌生理鹽水(參見附錄A.3)。

4.4 1mol/L氫氧化鈉(NaOH):稱取40g氫氧化鈉溶于1000mL蒸餾水中。

5 程序

5.1 樣品制備

以無菌操作取有代表性的樣品盛于滅菌容器內。如有包裝,則用75%乙醇在包裝開口處擦拭后取樣。

5.2 制備樣品勻液

5.2.1 固體或半固體樣品:以無菌操作,取25g或25mL樣品(根據樣品分布的均勻性程度,也可酌情增減樣品量,如50g或5σmL等),放入裝有225mL稀釋劑(磷酸鹽緩沖稀釋液或無菌生理鹽水,以下同)的滅菌均質杯內,于8000r/min均質1min~2min,或放入盛有225mL稀釋劑的無菌均質袋中,用拍擊式均質器拍打1min~2min,制成1:10的樣品勻液。如樣品均質時間超過2min,應在均質杯外加冰水冷卻。

5.2.2 干燥或干粉食品:以無菌操作取25g樣品,放入裝有225mL稀釋劑和適量玻璃珠的500m稀釋瓶中。迅速振搖,將樣品混勻,制成1:10的樣品勻液。振搖時,幅度為30cm,7s內振搖25次,也可用機械振蕩器振蕩15s代替手搖。

5.2.3 液體樣品:用滅菌吸管吸取25mL樣品,放人裝有225mL稀釋劑的500mL稀釋瓶中,按5.2.2中所述方法迅速振搖,制成1:10的樣品勻液。吸取樣品時,吸管插入液面下不要超過2.5cm。吸管內液體要在2s~4s內完全排入稀釋劑中。不要在稀釋劑中吹洗吸管。

5.3 稀釋樣品均液

5.3.1 取此樣品勻液1mL加到9mL的稀釋劑中,并以此類推,分別制成10-2,10-3,10-4三個連續(xù)稀釋度或其他合適稀釋度的樣品勻液,每個稀釋度換用一個新的無菌吸管。

5.3.2 所有樣品勻液都要在7s內沿直徑30cm的弧線搖動25次,搖動時要避免產生泡沫。

5.4 平板接種

5.4.1 每個稀釋度的樣品勻液各取1mL注人一個平皿,一式兩份,平皿預先要做適當的標記。如果樣品勻液在吸取前靜置時間超過了3min,要按上述方法再次搖動。

5.4.2 在原始樣品稀釋液制備后的15min內,每個平皿中注人12mL~15mL平板計數瓊脂(預先已放于45℃±1℃的水浴中恒溫),即每個樣品從開始稀釋到傾注*后一個平皿所用的時間不得超過15min。每個稀釋度的樣品分別制兩個瓊脂平板。

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